第一篇 生物實驗報告觀察植物細胞的有絲分裂600字
一、實驗目的
1.觀察植物細胞有絲分裂的過程，識別有絲分裂的不同時期。
2.初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。
3.初步掌握繪制生物圖的方法。
二、實驗原理
在植物體中，有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細胞，高等植物細胞有絲分裂的過
程，分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期?？梢杂酶弑讹@微鏡觀察植物細胞的
有絲分裂的過程，根據各個時期細胞內染色體（或染色質）的變化情況，識別該細胞處于有
絲分裂的哪個時期，細胞核內的染色體容易被堿性染料著色。
三、材料用具
洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、鉛筆、質量分數為15%的鹽酸、
體積分數為95%的酒精、質量分數為0.01g/ml的龍膽紫（或紫藥水）
四、實驗過程（見書Ｐ39）
1．洋蔥根尖的培養(yǎng)（提前3—4天）
2．解離：5min
3．漂洗: 10min
4．染色: 5min
5．制片
6．鏡檢
五、注意
1．解離充分是實驗成功的必備條件。解離充分，組織才能分散，細胞也不會重疊。
2 ．漂洗時間一定要足夠，否則細胞染不上色。
3 ．染色時，染液的濃度和染色時間必須掌握好。特別是染色不能過深，否則鏡下一片紫色，無法觀察。
六、討論
1．制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關鍵是什么？談談你自己的體會。
物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
2．在觀察清楚有絲分裂各個時期的細胞以后，繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的簡圖，并標明時期。
第二篇 生物化學實驗報告冊3050字
生物化學實驗報告冊范文
一、 實驗室規(guī)則
1．實驗前應認真預習實驗指導，明確實驗目的和要求，寫出預實驗報告。
2．進入實驗室必須穿白大衣。嚴格遵守實驗課紀律，不得無故遲到或早退。不得高聲說話。嚴禁拿實驗器具開玩笑。實驗室內禁止吸煙、用餐。
3．嚴格按操作規(guī)程進行實驗。實驗過程中自己不能解決或決定的問題，切勿盲目處理，應及時請教指導老師。
4．嚴格按操作規(guī)程使用儀器，凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動用，對貴重的精密儀器必須先熟知使用方法，才能開始使用；儀器發(fā)生故障，應立即關閉電源并報告老師，不得擅自拆修。
5．取用試劑時必須“隨開隨蓋”，“蓋隨瓶走”，即用畢立即蓋好放回原處，切忌“張冠李戴”，避免污染。
6．愛護公物，節(jié)約水、電、試劑，遵守損壞儀器報告、登記、賠償制度。
7．注意水、電、試劑的使用安全。使用易燃易爆物品時應遠離火源。用試管加熱時，管口不準對人。嚴防強酸強堿及有毒物質吸入口內或濺到別人身上。任何時候不得將強酸、強堿、高溫、有毒物質拋灑在實驗臺上。
8．廢紙及其它固體廢物嚴禁倒入水槽，應倒到垃圾桶內。廢棄液體如為強酸強堿，必須事先用水稀釋，方可倒入水槽內，并放水沖走。
9．以實事求是的科學態(tài)度如實記錄實驗結果，仔細分析，做出客觀結論。
實驗失敗，須認真查找原因，而不能任意涂改實驗結果。實驗完畢，認真書寫實驗報告，按時上交。
10．實驗完畢，個人應將試劑、儀器器材擺放整齊，用過的玻璃器皿應刷洗干凈歸置好，方可離開實驗室。值日生則要認真負責整個實驗室的清潔和整理，保持實驗整潔衛(wèi)生。離開實驗室前檢查電源、水源和門窗的安全等，并嚴格執(zhí)行值日生登記制度。
二、實驗報告的基本要求
實驗報告通過分析總結實驗的結果和問題，加深對有關理論和技術的理解與掌握，提高分析、綜合、概括問題的能力，同時也是學習撰寫研究論文的過程。
1．實驗報告應該在專用的生化實驗報告本上、按上述格式要求書寫。
2．實驗報告的前三部分①實驗原理、②實驗材料（包括實驗樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、③實驗步驟（包括實驗流程與操作步驟）要求在實驗課前預習后撰寫，作為實驗預習報告的內容。預習時也要考慮并設計好相應實驗記錄的表格。
3．每項內容的基本要求
（1）實驗原理：簡明扼要地寫出實驗的原理，涉及化學反應時用化學反應方程式表示。
（2）實驗材料：應包括各種來源的生物樣品及試劑和主要儀器。說明化學試劑時要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。試劑要標清所用的濃度。
（3）實驗步驟：描述要簡潔，不能照抄實驗講義，可以采用工藝流程圖的方式或自行設計的表格來表示，但對實驗條件和操作的關鍵環(huán)節(jié)應寫清楚，以便他人重復。
（4）實驗記錄：包括主要實驗條件、實驗中觀察到的現象及實驗中的原始數據。
（5）結果（定量實驗包括計算）：應把所得的實驗結果（如觀察現象）和數據進行整理、歸納、分析、對比，盡量用圖表的形式概括實驗的結果，如實驗組與對照組實驗結果的比較表等(有時對實驗結果還可附以必要的說明)。
（6）討論：不應是實驗結果的重述，而是以結果為基礎的邏輯推論。如對定性實驗，在分析實驗結果的基礎上應有中肯的結論。還可以包括關于實驗方法、操作技術和有關實驗的一些問題，對實驗異常結果的分析和評論，對于實驗設計的認識、體會和建議，對實驗課的改進意見等。
（7）結論：一般實驗要有結論，結論要簡單扼要，說明本次實驗所獲得的結果。
三、實驗報告的評分標準（百分制）
1．實驗預習報告內容（30分）
學生進入實驗室前應預習實驗，并書寫預習報告。實驗預習報告應包括以下三部分： ①實驗原理（10分）：要求以自己的語言歸納要點；②實驗材料（5分）：包括樣品、試劑及儀器。只列出主要儀器、試劑（常規(guī)材料不列）；③實驗方法（15分）：包括流程或路線、操作步驟，要以流程圖、表格式給出要點，簡明扼要。依據各部分內容是否完整、清楚、簡明等，分以下三個等級給分。
優(yōu)秀：項目完整，能反映實驗者的加工、整理、提煉。
合格：較完整，有一定整理，但不夠精煉。
不合格：不完整、缺項，大段文字，完全照抄教材，記流水賬。
實驗預習報告不合格者，不允許進行實驗。該實驗應重新預約，待實驗室安排時間后方可進行實驗。
2．實驗記錄內容（20分）
實驗記錄是實驗教學、科學研究的重要環(huán)節(jié)之一，必須培養(yǎng)嚴謹的科學作風。
實驗記錄的主要內容包括以下三方面：①主要實驗條件（如材料的來源、質量；試劑的規(guī)格、用量、濃度；實驗時間、操作要點中的技巧、失誤等，以便總結實驗時進行核對和作為查找成敗原因的參考依據）；②實驗中觀察到的現象（如加入試劑后溶液顏色的變化）；③原始實驗數據：設計實驗數據表格（注意三線表格式），準確記錄實驗中測得的原始數據。記錄測量值時，要根據儀器的精確度準確記錄有效數字（如吸光值為0.050，不應寫成0.05），注意有效數字的.位數。
實驗記錄應在實驗過程中書寫；應該用鋼筆或者圓珠筆記錄，不能用鉛筆。記錄不可擦抹和涂改，寫錯時可以準確劃去重記。記錄數據時請教師審核并簽名。
實驗記錄分以下三個等級給分。
優(yōu)秀：如實詳細地記錄了實驗條件、實驗中觀察到的現象、結果及實驗中的原始數據（如三次測定的吸光度值）等；實驗記錄用鋼筆或者圓珠筆記錄，沒有抹擦和涂改跡象。書寫準確，表格規(guī)范（三線表）。有教師的簽字審核。
合格：記錄了主要實驗條件，但不詳細、凌亂；實驗中觀察到的現象不細致；原始數據無涂改跡象，但不規(guī)范。有教師的簽字審核。
不合格：記錄不完整，有遺漏；原始數據有抹擦和涂改跡象、捏造數據（以0分計）；圖、表格形式錯誤；用鉛筆記錄原始數據；無教師的簽字審核。 若記錄的結果有懷疑、遺漏、丟失，必須重做實驗，培養(yǎng)嚴謹的科學作風。
3．結果與討論（45分）
（1）數據處理（5分）
對實驗中所測得的一系列數值，要選擇合適的處理方法進行整理和分析。數據處理時，要根據計算公式正確書寫中間計算過程或推導過程及結果，得出最終實驗結果。要注意有效數字的位數、單位（國際單位制）。經過統計處理的數據要以_〒sd表示?？煞殖梢韵氯齻€等級給分。
優(yōu)秀：處理方法合理，中間過程清楚，數據格式單位規(guī)范。
合格：處理方法較合理，有中間計算過程；數據格式單位較規(guī)范。
不合格：處理方法不當；無中間過程；有效數字的位數、單位不規(guī)范。
（2）結果（20分）
實驗結果部分應把所觀察到的現象和處理的最終數據進行歸納、分析、比對，以列表法或作圖法來表示。同時對結果還可附以必要的說明。
要注意圖表的規(guī)范：表格要有編號、標題；表格中數據要有單位（通常列在每一列頂端的第一行或每一行左端的第一列）。圖也要有編號、標題，標注在圖的下方；直角坐標圖的縱軸和橫軸要標出方向、名稱、單位和長度單位；電泳圖譜和層析圖譜等要標明正、負極方向及分離出的區(qū)帶、色帶或色斑的組分或成分。電泳結果還要標記泳道，并在圖題下給出泳道的注釋；要標出分子量標準的各條帶的大小。并且注意需要結合圖表對結果進行較詳細的解釋說明。
可分成以下三個等級給分。
優(yōu)秀：實驗結果有歸納、 解釋說明，結果準確，格式規(guī)范。
合格：堆砌實驗現象、數據，解釋說明少。
不合格：最終實驗結果錯誤且無解釋說明，圖表、數字不規(guī)范。
（3）討論（20分）
討論應圍繞實驗結果進行，不是實驗結果的重述，而是以實驗結果為基礎的邏輯推論，基本內容包括：①用已有的專業(yè)知識理論對實驗結果進行討論，從理論上對實驗結果的各種資料、數據、現象等進行綜合分析、解釋，說明實驗結果，重點闡述實驗中出現的一般規(guī)律與特殊性規(guī)律之間的關系。
生物化學實驗報告冊范文
第三篇 生物葉綠體中色素的提取和分離實驗報告500字
生物《葉綠體中色素的提取和分離》實驗報告
一、實驗目的
1. 學會提取和分離葉綠體中色素的方法。
2. 比較、觀察葉綠體中四種色素：理解它們的特點及與光合作用的`關系
二、實驗原理
光合色素主要存在于高等植物葉綠體的基粒片層上，而葉綠體中的色素能溶于有機溶中。故要提取色素，要破壞細胞結構，破壞葉綠體膜，使基粒片層結構直接與有機溶劑接觸，使色素溶解在有機溶劑中。葉綠體中的色素有四種，不同色素在層析液(脂溶性強的有機溶劑)中的溶解度不同，因而隨層析液的擴散速度也不同。
三、材料用具
取新鮮的綠色葉片、定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、紗布、剪刀、小試管、培養(yǎng)皿、毛細吸管、量筒、有機溶劑、層析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸鈣。
四、實驗過程(見書p54)
1.提取色素：
2.制備濾紙條：
3.色素分離，紙層析法。(不要讓濾液細線觸及層析液)
4.觀察：
層析后，取出濾紙，在通風處吹干。觀察濾紙條上出現色素帶的數目、顏色、位置和寬窄。結果是：4條色素帶從上而下依次是：胡蘿卜素(橙黃色)、葉黃素(黃色)、葉綠素a(藍綠色)、葉綠素b(黃綠色)。
五、討論
1.濾紙條上的濾液細線為什么不能接觸到層析液？
2.提取和分離葉綠體中色素的關鍵是什么？
第四篇 生物觀察植物細胞的質壁分離與復原的實驗報告500字
生物《觀察植物細胞的質壁分離與復原》的實驗報告
一、實驗目的
1. 初步學會觀察植物細胞質壁分離和復原的方法。
2. 理解植物細胞發(fā)生滲透作用的原理。
二、實驗原理
當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞液中的水分就透過原生質層進入外界溶 液中，使細胞壁和原生質層都出現一定的.收縮。由于原生質層比細胞壁的收縮性大，當細胞不斷失水時，原生質層就會與細胞壁逐漸分離開，也就是分升了質壁分離當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，外界溶液中的水分就透過原生質層進入細胞液中，整個原生質層就會慢慢地恢復成原來的狀態(tài)，使植物細胞逐漸發(fā)生質壁分離復原。
三、材料用具
紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、實驗過程（見書ｐ60）
五、討論
1．如果將洋蔥表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中，這些表皮細胞會出現什么現象？
2．當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時，紅細胞會不會發(fā)生質壁分離現象？為什么？
3．畫一個細胞在正常狀態(tài)下到經過0.3g/ml蔗糖溶液處理，再經過清水處理的細胞變化的一系列模式圖。
第五篇 生物實驗室述職報告模板1200字
時間過地飛快，忙忙碌碌中又過了一學年，在這一學年里，我一向以一名優(yōu)秀實驗員的標準要求自己，認真學習，努力工作，用心思考，力求在工作、學習上有進步，在教師修養(yǎng)上有提高，爭取做一名合格的實驗員。
在思想上，熱愛祖國，熱愛____，堅決擁護黨的領導及路線、方針、政策;提高認識，增強緊迫感、時代感、職責感，適應發(fā)展要求，強化“六個意識”：第一，強化自我充電意識;第二，強化科研意識;第三，強化信息網絡意識;第四，強化合作意識;第五，強化創(chuàng)新意識;第六，強化服務意識。
在工作上，踏實進取、認真謹慎，盡職盡責，對自己負責、對單位負責、樹立大局意識、服務意識、使命意識，努力把“全心全意為學校服務”的宗旨體此刻每個細節(jié)中;以改善工作作風、講求工作方法、注重工作效率、提高工作質量為目標，用心努力，較好地完成了全年的各項工作任務。
本學期生物實驗室的工作重點仍是為輔助生物理論教學的順利進行，開展好實驗教學。生物實驗具備培養(yǎng)學生觀察和動手潛力的功能，更有培養(yǎng)學生動腦、啟迪思維、開發(fā)潛能的作用，現將本學期生物實驗工作做如下總結：
一、隨著學期工作的結束，實驗室的維護與管理工作又將開始，為新學期理論教學工作的順利開展做好準備，實驗室的管理工作是一個不可缺的重要環(huán)節(jié)，個性是二線為教學服務的管理工作，是較零碎而不大起眼的工作。但是，在管理工作上，仍要將儀器進行科學規(guī)范管理。實驗室的儀器較多，繁雜。規(guī)范的管理可使人看上去就要有一種既科學又舒適的感覺。因此在原有的管理上，除了將儀器進行分門別類分柜，分層放置，儀器貼有標簽等外，按照管理和實驗的性能，將儀器進一步規(guī)范化，這樣一來教師使用方便，效率較高。
二、本學期期末仍要做好儀器防銹，防塵，防潮等工作，儀器使用以后防銹工作不可少的，個性是較精密的顯微鏡等儀器，每使用后，要認真清理和擦試鏡頭和有關活動的部件，然后裝入箱內保存，定期進行檢查，發(fā)現問題立即采取措施。讓所保管的所有儀器幾乎無銹、無塵和受潮現象。
三、認真做好儀器的維修工作。每一學期結束前，必須要將儀器進行全面清理和維修，為下學期做好充分準備工作。
四、輔助一線教師提高生物教學效果，優(yōu)質服務是二線工作人員的職責，也是學校發(fā)展的基礎。因此在實驗管理工作中，除了要熟悉教材，還要掌握分組實驗和演示實驗與教師任課的大致進度和時間，做好實驗的一切準備工作。
五、生物實驗室的工作屬二線管理工作，在工作中幾乎不會有較大的教學成果，工作壓力也不會有一線教師的那么大。但是，隨著社會的發(fā)展，學校的工作也會隨著發(fā)展和變化。因此在本學期完成任務的前提下，應充分利用余業(yè)時間學習專業(yè)知識和一些管理常識，不斷豐富自己，爭取早日像一線教師一樣站在最前線努力工作或使自己的管理工作更具特色，為以后的學校的發(fā)展做出應有的貢獻。
六、按時打掃實驗室衛(wèi)生，確保室內外的整潔。實驗室的整潔能夠讓任課教師和學生的情緒舒坦，是任課教師上課更有效率，學生學習更有激情。
第六篇 微生物的染色實驗課堂報告1250字
微生物的染色實驗課堂報告范文
一、實驗題目：
微生物的革蘭氏染色
二、實驗目的：
1、學習并初步掌握革蘭氏染色法；
2、了解革蘭氏染色的原理；
3、鞏固顯微鏡的使用。
三、實驗原理：
革蘭氏染色是1884年丹麥病理學家christain gram氏創(chuàng)立的，是細菌學中最重要的鑒別染色法。染色步驟分為四個部分：
1、初染：加入堿性染料結晶紫固定細菌圖片；
2、媒染：加入碘液，碘與結晶紫形成一種不溶于水的復合物；
3、脫色：利用有機溶劑乙醇或丙酮進行脫色；
g-和g+細胞壁的比較：
1、陽性（g+）菌細胞壁特點：細胞壁厚，只有一層，主要由肽聚糖構成，肽聚糖含量高，結構緊密，脂類含量低。當乙醇脫色時，細胞壁肽聚糖層孔徑變小，通透性降低，結晶紫和碘的復合物被保留在細胞壁內，復染后仍顯紫色（如芽孢桿菌）。
2、陰性（g-）菌細胞壁特點：細胞壁薄，由兩層構成，內壁層和外壁層，細胞壁中脂類中脂類物質含量較高，肽聚糖含量較低，網狀結構交聯程度低，乙醇脫色時溶解了脂類物質，通透性增強，結晶紫與碘的復合物易被乙醇抽提出來，因此，革蘭氏陰性菌細胞被脫色，當復染時，脫掉紫色的細胞的細胞壁又著上紅色（例如大腸桿菌）。
四、實驗器材：
1、菌種：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。
2、溶液和試劑：革蘭氏染液、草酸銨結晶紫染液、碘液、95%乙醇、番紅復染液、水。
3、儀器及其他用品：酒精燈、載玻片、顯微鏡、接種環(huán)、試管架、濾紙、滴管。
五、實驗步驟：
1、取一個載玻片，將其洗凈并沿一個方向擦拭干凈，直至液體不再其上收縮為止；將接種環(huán)整平，用灼燒過的接種環(huán)在混勻的菌種中取菌，按常規(guī)方法圖片，應涂大，不宜過厚。
2、打開酒精燈，用火焰固定，不宜烤得太狠，否則菌種呈假陽性。
3、輕旋結晶紫染液滴管，將其旋出，滴加1滴草酸銨結晶紫染液覆蓋涂菌部位（輕晃使其完全覆蓋），染色40s。
4、染色完成后傾去染液，水洗至流出水為無色。
5、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。
6、在涂菌部位滴加碘液，覆蓋1min。
7、媒染完成后，傾去碘液，水洗至流出水無色。
8、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。
9、將載玻片放在白色筆記本上，用滴管滴加95%乙醇脫色，脫色30~40s，不宜脫色太狠，否則菌種呈假陰性。
10、脫色完成后立即用水洗去乙醇。
11、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。
12、滴加番紅復染液，染色4min。
13、染色完成后，水洗至流出水無色。
14、吸去殘留水并晾干。
15、用顯微鏡觀察并繪圖。
用以上步驟完成：大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混合圖片染色、大腸桿菌單獨菌種染色、金黃色葡萄球菌單獨菌種染色。
六、注意事項：
1、選用活躍生長期菌種染色，老齡的'革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。
2、圖片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性。
3、脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。
七、實驗結果與討論：
1、結果：
繪出高倍鏡下觀察的菌體圖像。
2、思考題：
（1）寫出常見的革蘭氏陽性菌與陰性菌，包括致病菌。
（2）革蘭氏染色的原理是什么？印象因素有哪些？
（3）如何驗證你的染色結果是否正確？
微生物的染色實驗課堂報告范文
第七篇 生物實驗報告觀察植物細胞的質壁分離與復原500字
一、實驗目的
1. 初步學會觀察植物細胞質壁分離和復原的方法。
2. 理解植物細胞發(fā)生滲透作用的原理。
二、實驗原理
當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞液中的水分就透過原生質層進入外界溶 液中，使細胞壁和原生質層都出現一定的收縮。由于原生質層比細胞壁的收縮性大，當細胞不斷失水時，原生質層就會與細胞壁逐漸分離開，也就是分升了質壁分離當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，外界溶液中的水分就透過原生質層進入細胞液中，整個原生質層就會慢慢地恢復成原來的狀態(tài)，使植物細胞逐漸發(fā)生質壁分離復原。
三、材料用具
紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、實驗過程（見書Ｐ60）
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五、討論
1．如果將洋蔥表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中，這些表皮細胞會出現什么現象？
2．當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時，紅細胞會不會發(fā)生質壁分離現象？為什么？
3．畫一個細胞在正常狀態(tài)下到經過0.3g/ml蔗糖溶液處理，再經過清水處理的細胞變化的一系列模式圖。
第八篇 初一生物實驗報告450字
實驗 探索淀粉酶對淀粉和蔗糖的水解作用
一、實驗目的
1. 初步學會探索酶催化特定化學反應的方法。
2. 探索淀粉酶是否只能催化特定的化學反應。
二、實驗原理
淀粉和蔗糖都是非還原糖，它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖，還原糖能夠與
斐林試劑發(fā)生氧化還原反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。
用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液，再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖，就可
以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學反應。
三、材料用具
滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網、酒精燈、燒杯、質量分數為2%的
新鮮淀粉酶溶液、質量分數為3%的可溶性淀粉溶液、質量分數為3%的蔗糖溶液、斐林試劑
四、實驗過程（見書Ｐ47）物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
五、討論
1．制備的可溶性淀粉溶液，必須完全冷卻后才能使用。為什么？
２．兩支試管保溫時，為什么要控制在60 ℃左右(低于50 ℃或高于75 ℃)？
3．如果2號試管也產生了磚紅色沉淀，可能是由哪些原因造成的？
第九篇 生物實驗報告比較過氧化氫酶和fe3+的催化效率250字
一、實驗目的
1.初步學會探索酶的催化效率的方法。
2.探索過氧化氫酶和Fe3+催化效率的高低。
二、實驗原理
新鮮的豬肝中含有過氧化氫酶，Fe3+是一種無機催化劑，它們都可以催化過氧化氫分解
成水和氧
三、材料用具
新鮮的質量分數為20%的豬肝研磨液、滴管、試管、火柴、試管架、質量分數為3.5%的氯化鐵溶液、體積分數為3%的過氧化氫溶液。
四、實驗過程（見書Ｐ30）您正瀏覽的文章由()整理，版權歸原作者、原出處所有。
五、討論
實驗時為什么要選用新鮮的豬肝？在滴入豬肝研磨液和氯化鐵溶液時能否公用一個吸管？為什么？
第十篇 高一生物實驗報告大全4100字
高一生物實驗報告1-4
實驗一觀察dna和rna在細胞中的分布
實驗原理：dna綠色，rna紅色
分布：真核生物dna主要分布在細胞核中，線粒體和葉綠體內也含有少量的dna;rna主要分布在細胞質中。
實驗結果：細胞核呈綠色，細胞質呈紅色。
實驗二物質鑒定
還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀
脂肪+蘇丹iii橘黃色
脂肪+蘇丹iv紅色
蛋白質+雙縮脲試劑紫色反應
1、還原糖的檢測
(1)材料的選?。哼€原糖含量高，白色或近于白色，如蘋果，梨，白蘿卜。
(2)試劑：斐林試劑(甲液：0.1g/ml的naoh溶液，乙液：0.05g/ml的cuso4溶液)，現配現用。
(3)步驟：取樣液2ml于試管中→加入剛配的斐林試劑1ml(斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻后再加入)→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化(白色→淺藍色→磚紅色)
★模擬尿糖的檢測
1、取樣：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、檢測方法：斐林試劑(水浴加熱)或班氏試劑或尿糖試紙
3、結果：(用斐林試劑檢測)試管內發(fā)生出現磚紅色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出現磚紅色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因為糖尿病患者的尿液中含有還原糖，與斐林試劑發(fā)生反應產生磚紅色沉淀，而正常人尿液中無還原糖，所以沒有發(fā)生反應。
2、脂肪的檢測
(1)材料的選取：含脂肪量越高的組織越好，如花生的子葉。
(2)步驟：制作切片(切片越薄越好)將最薄的花生切片放在載玻片中央
染色(滴蘇丹ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴體積分數50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)
制作裝片(滴1～2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片)
鏡檢鑒定(顯微鏡對光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒)
3、蛋白質的檢測
(1)試劑：雙縮脲試劑(a液：0.1g/ml的naoh溶液，b液：0.01g/ml的cuso4溶液)
(2)步驟：試管中加樣液2ml→加雙縮脲試劑a液1ml，搖勻→加雙縮尿試劑b液4滴，搖勻→觀察顏色變化(紫色)
考點提示：
(1)常見還原性糖與非還原性糖有哪些？
葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。
(2)還原性糖植物組織取材條件？
含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如：蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。
(3)研磨中為何要加石英砂？不加石英砂對實驗有何影響？
加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時溶液顏色變化不明顯。
(4)斐林試劑甲、乙兩液的使用方法？混合的目的？為何要現混現用？
混合后使用;產生氫氧化銅;氫氧化銅不穩(wěn)定。
(5)還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序為：淺藍色棕色磚紅色
(6)花生種子切片為何要??？只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀察。
(7)轉動細準焦螺旋時，若花生切片的細胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？切片的厚薄不均勻。
(8)脂肪鑒定中乙醇作用？洗去浮色。
(9)雙縮脲試劑a、b兩液是否混合后用？先加a液的目的。怎樣通過對比看顏色變化？
不能混合;先加a液的目的是使溶液呈堿性;先留出一些大豆組織樣液做對比。
實驗三觀察葉綠體和細胞質流動
1、材料：新鮮蘚類葉、黑藻葉或菠菜葉，口腔上皮細胞臨時裝片
2、原理：葉綠體在顯微鏡下觀察，綠色，球形或橢球形。
用健那綠染液染色后的口腔上皮細胞中線粒體成藍綠色，細胞質接近無色。
知識概要：
取材制片低倍觀察高倍觀察
考點提示：
(1)為什么可直接取用蘚類的小葉，而不能直接取用菠菜葉？
因為蘚類的小葉很薄，只有一層細胞組成，而菠菜葉由很多層細胞構成。
(2)取用菠菜葉的下表皮時，為何要稍帶些葉肉？
表皮細胞除保衛(wèi)細胞外，一般不含葉綠體，而葉肉細胞含較多的葉綠體。
(3)怎樣加快黑藻細胞質的流動速度？最適溫度是多少？進行光照、提高水溫、切傷部分葉片;25℃左右。
(4)對黑藻什么部位的細胞觀察，所觀察到的細胞質流動的現象最明顯？葉脈附近的細胞。
(5)若視野中某細胞中細胞質的流動方向為順時針，則在裝片中該細胞的細胞質的實際流動方向是怎樣的？仍為順時針。
(6)是否一般細胞的細胞質不流動，只有黑藻等少數植物的細胞質才流動？
否，活細胞的細胞質都是流動的。
(7)若觀察植物根毛細胞細胞質的流動，則對顯微鏡的視野亮度應如何調節(jié)？
視野應適當調暗一些，可用反光鏡的平面鏡來采光或縮小光圈。
(8)在強光照射下，葉綠體的向光面有何變化？葉綠體的受光面積較小有一面面向光源實驗四觀察有絲分裂。
1、材料：洋蔥根尖(蔥，蒜)
2、步驟：
(一)洋蔥根尖的培養(yǎng)
(二)裝片的制作
制作流程：解離→漂洗→染色→制片
1.解離：藥液：質量分數為15%的鹽酸，體積分數為95%的酒精(1：1混合液)。時間：3~5min.目的：使組織中的細胞相互分離開來。
2.漂洗：用清水漂洗約10min.目的：洗去藥液，防止解離過度，并有利于染色。
3.染色：用質量濃度為0.01g/ml或0.02g/ml的龍膽紫溶液(或醋酸洋紅液)染色3~5min。目的：使染色體著色，利于觀察。
4.制片：將根尖放在載玻片上，加一滴清水，并用鑷子把根尖弄碎，蓋上蓋玻片，在蓋玻片上再加一片載玻片。然后用拇指輕輕地按壓載玻片。目的：使細胞分散開來，有利于觀察。
(三)觀察
1、先在低倍鏡下找到根尖分生區(qū)細胞：細胞呈正方形，排列緊密，有的細胞正在分裂。
2、換高倍鏡下觀察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂間期。(注意各時期細胞內染色體形態(tài)和分布的特點)。其中，處于分裂間期的細胞數目最多。
考點提示：
(1)培養(yǎng)根尖時，為何要經常換水？增加水中的氧氣，防止根進行無氧呼吸造成根的腐爛。
(2)培養(yǎng)根尖時，應選用老洋蔥還是新洋蔥？為什么？應選用舊洋蔥，因為新洋蔥尚在休眠，不易生根。
(3)為何每條根只能用根尖？取根尖的時間是何時？為何？
因為根尖分生區(qū)的細胞能進行有絲分裂;上午10時到下午2時;因為此時細胞分裂活躍。
(4)解離和壓片的目的分別是什么？壓片時為何要再加一塊載玻片？解離是為了使細胞相互分離開來，壓片是為了使細胞相互分散開來;再加一塊載玻片是為了受力均勻，防止蓋玻片被壓破。
(5)若所觀察的組織細胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么？壓片時用力過大。
(6)解離過程中鹽酸的作用是什么？丙酮可代替嗎？分解和溶解細胞間質;不能，而硝酸可代替。
(7)為何要漂洗？洗去鹽酸便于染色。
(8)細胞中染色最深的結構是什么？染色最深的結構是染色質或染色體。
(9)若所觀察的細胞各部分全是紫色，其原因是什么？
染液濃度過大或染色時間過長。
(10)為何要找分生區(qū)？分生區(qū)的特點是什么？能用高倍物鏡找分生區(qū)嗎？為什么？
因為在根尖只有分生區(qū)的細胞能夠進行細胞分裂;分生區(qū)的特點是：細胞呈正方形，排列緊密，有的細胞處于分裂狀態(tài);不能用高倍鏡找分生區(qū)，因為高倍鏡所觀察的實際范圍很小，難以發(fā)現分生區(qū)。
(11)分生區(qū)細胞中，什么時期的細胞最多？為什么？間期;因為在細胞周期中，間期時間最長。
(12)所觀察的細胞能從中期變化到后期嗎？為什么？
不能，因為所觀察的細胞都是停留在某一時期的死細胞。
(13)觀察洋蔥表皮細胞能否看到染色體？為什么？不能，因為洋蔥表皮細胞一般不分裂。
(14)若觀察時不能看到染色體，其原因是什么？
沒有找到分生區(qū)細胞;沒有找到處于分裂期的細胞;染液過稀;染色時間過短。
高一生物實驗報告5-9
實驗五比較酶和fe3+的催化效率
考點提示：
(1)為何要選新鮮的肝臟？因為在不新鮮的肝臟中，過氧化氫酶的活性會由于細菌的破壞而降低。
(2)該實驗中所用試管應選較粗的還是較細的？為什么？應選用較粗的，因為在較細的試管中容易形成大量的氣泡，而影響衛(wèi)生香的復燃。
(3)為何要選動物的肝臟組織來做實驗，其他動植物的組織的研磨液能替代嗎？因為肝臟組織中過氧化氫酶含量較豐富;其它動植物組織也含有少量的過氧化氫酶，所以能夠替代。
(4)相同質量的塊狀肝臟和肝臟研磨液，哪一個催化效果好？為什么？研磨液效果好;因為它增加過氧化氫酶與過氧化氫的接觸面積。
(5)滴入肝臟研磨液和氯化鐵溶液時，可否共用下個吸管？為什么？不可共用，防止過氧化氫酶與氯化鐵混合，而影響實驗效果。
實驗六色素的提取和分離
1、原理：葉綠體中的色素能溶解在有機溶劑丙酮或無水乙醇——提取色素
各色素在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上擴散速度不同——分離色素
2、步驟：
(1)提取色素研磨
(2)制備濾紙條
(3)畫濾液細線：均勻，直，細，重復若干次
(4)分離色素：不能讓濾液細線觸及層析液
(5)觀察和記錄：結果濾紙條上從上到下依次為：橙黃色(胡蘿卜素)、黃色(葉黃素)、藍綠色(葉綠素a)、黃綠色(葉綠素b)。
考點提示：
(1)對葉片的要求？為何要去掉葉柄和粗的時脈？綠色、是深綠色。因為葉柄和葉脈中所含色素很少。
(2)二氧化硅的作用？不加二氧化硅對實驗有何影響？
為了使研磨充分。不加二氧化硅，會使濾液和色素帶的顏色變淺。
(3)丙酮的作用？它可用什么來替代？用水能替代嗎？
溶解色素。它可用酒精等有機溶劑來代替，但不能用水來代替，因為色素不溶于水。
(4)碳酸鈣的作用？不加碳酸鈣對實驗有何影響？
保護色素，防止在研磨時葉綠體中的色素受到破壞。不加碳酸鈣，濾液會變成黃綠色或褐色。
(5)研磨為何要迅速？要充分？過濾時為何用布不用濾紙？研磨迅速，是為了防止丙酮大量揮發(fā);只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中來。色素不能通過濾紙，但能通過尼龍布。
(6)濾紙條為何要剪去兩角？防止兩側層析液擴散過快。
(7)為何不能用鋼筆或圓珠筆畫線？因為鋼筆水或圓珠筆油中含有其它色素，會影響色素的分離結果。
(8)濾液細線為何要直？為何要重畫幾次？防止色素帶的重疊;增加色素量，使色素帶的顏色更深一些。
(9)濾液細線為何不能觸到層析液？防止色素溶解到層析液中。
(10)濾紙條上色素為何會分離？
由于不同的色素在層析液中的溶解度不同，因而它們隨層析液在濾紙條上的擴散速度就不同。
(11)色素帶最寬的是什么色素？它在層析液中的溶解度比什么色素大一些？
最寬的色素帶是葉綠素a，它的溶解度比葉綠素b大一些。
(12)濾紙條上相互間距的是哪兩種色素？胡蘿卜素和葉黃素。
(13)色素帶最窄的是第幾條色素帶？為何？
第一條色素帶，因為胡蘿卜素在葉綠體的四種色素中含量最少。
實驗七觀察質壁分離和復原
1、條件：細胞內外溶液濃度差，活細胞，大液泡
2、材料：紫色洋蔥鱗片葉外表皮細胞(具紫色大液泡)，質量濃度0.3g/ml的蔗糖溶液，清水等。
3、步驟：制作洋蔥鱗片葉外表皮細胞臨時裝片→觀察→蓋玻片一側滴蔗糖溶液，另一側用吸水紙吸引→觀察(液泡由大到小，顏色由淺變深，原生質層與細胞壁分離)→蓋玻片一側滴清水，另一側用吸水紙吸引→觀察(質壁分離復原)
4、結論：細胞外溶液濃度>細胞內溶液濃度，細胞失水質壁分離
細胞外溶液濃度<細胞內溶液濃度，細胞吸水質壁分離復原
知識概要：制片觀察加液觀察加水觀察
考點提示：
(1)洋蔥為何要選紫色的？若紫色過淡怎么辦？
紫色的洋蔥有紫色的大液泡，便于觀察液泡的大小變化;縮小光圈，使視野變暗些。
(2)洋蔥表皮應撕還是削？為何？表皮應撕不能削，因為削的表皮往往太厚。
(3)植物細胞為何會出現質壁分離？動物細胞會嗎？當細胞失去水分時，其原生質層的伸縮性大于細胞壁的伸縮性;動物細胞不會發(fā)生質壁分離，因為動物細胞沒有細胞壁。
(4)質壁分離時，液泡大小和顏色的變化？復原時呢？
細胞發(fā)生質壁分離時，液泡變小，紫色加深;當細胞質壁分離復原時，液泡變大，紫色變淺。
(5)若發(fā)生質壁分離后的細胞，不能發(fā)生質壁分離復原，其原因是什么？
細胞已經死亡(可能是外界溶液濃度過大，細胞失水過多或質壁分離時間過長)
(6)高倍鏡使用前，裝片如何移動？
若要把視野中上方的物像移到視野的正中心，則要將裝片繼續(xù)向上移動。若要把視野中左方的物像移到視野的正中心，則要將裝片繼續(xù)向左方移動，因為顯微鏡視野中看到的是倒像。
(7)換高倍物鏡后，怎樣使物像清晰？視野明暗度會怎樣變化？如何調亮？換高倍物鏡后，應調節(jié)細準焦螺旋使物像變得清晰;視野會變暗，可調大光圈或改用反光鏡的凹面鏡來使視野變亮。
(8)所用目鏡、物鏡的長度與放大倍數的關系？目鏡越長，放大倍數越小;物鏡越長，放大倍數越大。
(9)物像清晰后，物鏡與載玻片之間的距離和放大倍數的關系？
物鏡與載玻片之間的距離越小，放大倍數越大。
(10)總放大倍數的計算方法？放大倍數具體指面積的放大倍數還是長度的放大倍數？
總放大倍數等于目鏡放大倍數與物鏡放大倍數的乘積;放大倍數是指細小物體長度或寬度的放大倍數。
(11)放大倍數與視野中細胞大小、多少、視野明暗的關系？
放大倍數越大，視野中細胞越大、數目越少、視野越暗。
(12)更換目鏡，若異物消失，則異物在目鏡上;更換物鏡，若異物消失，則異物在物鏡上、移動載玻片，若異物移動，則異物在載玻片上。
(13)怎樣利用質壁分離現象來測定植物細胞液的濃度？①配制一系列濃度從小到大的蔗糖溶液②分別用以上不同濃度的溶液制成某植物細胞的臨時裝片③用顯微鏡觀察某植物細胞是否發(fā)生質壁分離。某植物細胞液的濃度就介于不能引起質壁分離的濃度和能引起質壁分離的濃度之間。
實驗八dna的粗提取與鑒定
考點提示：
(1)雞血能用豬血代替嗎？為什么？不能，因為哺乳動物的紅細胞中沒有細胞核，不能提取dna.
(2)雞血中為何要加檸檬酸鈉？為何要棄去雞血細胞的上清液？
防止血液凝固;因為上清液是血漿，不含細胞和dna.
(3)脹破細胞的方法？能用生理鹽水嗎？
向血細胞中加入蒸餾水，使細胞大量吸水而脹破;不能用生理鹽水，因為血細胞在蒸餾水中不能吸收水分。
(4)該實驗中應用玻璃燒杯還是塑料燒杯？為什么？用塑料燒杯，因為玻璃燒杯容易吸附dna.
(5)前后三次過濾時，所用紗布的層數分別是多少？為什么？
第一次用一層紗布，有利于核物質透過紗布進入濾液;第二次用多層紗布，能防止dna絲狀物透過紗布進入濾液;第三次用兩層紗布，既有利于dna透過紗布，又能防止其它雜質透過紗布。
(6)若實驗中所得黏稠物太少，其原因是什么？第一次加蒸餾水過少，細胞未充分脹破;第二次加蒸餾水過多或過少;第一次過濾用了多層紗布;第二次過濾用了一層紗布。
(7)兩次加入蒸餾水的目的分別是什么？
第一次是為了使血細胞吸水脹破;第二次是為了降低氯化鈉的濃度，有利于dna有析出。
(8)實驗中攪拌溶液時，為何總要沿一個方向攪拌？防止dna分子受到損傷。
(9)兩次析出dna的方法分別是什么？原理分別是什么？
第一次是加蒸餾水，降低氯化鈉的濃度，促使dna析出;第二次是加入冷酒精，因為dna不溶于酒精溶液。
(10)三次溶解dna的液體分別是什么？原理分別是什么？
第一次、第二次都是用濃度為2mol/l的氯化鈉溶液，第三次用的是0.015mol/l(或2mol/l)的氯化鈉溶液。其原理是dna在氯化鈉中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。當氯化鈉的物質的量濃度為0.14mol/l時，dna的溶解度最低。2mol/l的氯化鈉溶液和0.015mol/l的氯化鈉溶液對dna的溶解度都比較高。
(11)鑒定dna時為何要用兩支試管？其現象分別是什么？
其中不加dna的試管起對照作用。該試管溶液不變色，另一支加有dna的試管溶液變藍色。
實驗九探究酵母菌的呼吸方式
1、原理：酵母菌在有氧條件下進行有氧呼吸，產生二氧化碳和水：
c6h12o6+6o2+6h2o6→co2+12h2o+能量
在無氧條件下進行無氧呼吸，產生酒精和少量二氧化碳：
c6h12o6→2c2h5oh+2co2+少量能量
2、裝置：(見課本)
3、檢測：(1)檢測co2的產生：使澄清石灰水變渾濁，或使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃。
(2)檢測酒精的產生：橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下與酒精發(fā)生反應，變成灰綠色。
高一生物易錯知識點
1.使能量持續(xù)高效的流向對人類最有意義的部分
2.能量在2個營養(yǎng)級上傳遞效率在10%—20%
3.單向流動逐級遞減
4.真菌ph5.0—6.0細菌ph6.5—7.5放線菌ph7.5—8.5
5.物質作為能量的載體使能量沿食物鏈食物網流動
6.物質可以循環(huán)，能量不可以循環(huán)
7.河流受污染后，能夠通過物理沉降化學分解微生物分解，很快消除污染
8.生態(tài)系統的結構：生態(tài)系統的成分+食物鏈食物網
9.淋巴因子的成分是糖蛋白
病毒衣殼的是1—6多肽分子個
原核細胞的細胞壁：肽聚糖
10.過敏：抗體吸附在皮膚，黏膜，血液中的某些細胞表面，再次進入人體后使細胞釋放組織胺等物質.
11.生產者所固定的太陽能總量為流入該食物鏈的總能量
12.效應b細胞沒有識別功能
13.萌發(fā)時吸水多少看蛋白質多少
大豆油根瘤菌不用氮肥
脫氨基主要在肝臟但也可以在其他細胞內進行
14.水腫：組織液濃度高于血液
15.尿素是有機物，氨基酸完全氧化分解時產生有機物
16.是否需要轉氨基是看身體需不需要
17.藍藻：原核生物，無質粒
酵母菌：真核生物，有質粒
高爾基體合成纖維素等
trna含chonps
18.生物導彈是單克隆抗體是蛋白質
19.淋巴因子：白細胞介素
第十一篇 生物實驗報告格式850字
生物實驗報告格式
一、實驗目的
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的基本方法。
二、實驗原理
1.還原糖的鑒定原理 生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內都含有還原性基團(游離醛基或游離酮基)，因此叫做還原糖。蔗糖的分子內沒有游離的半縮醛羥基，因此叫做非還原性糖，不具有還原性。本實驗中，用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質量濃度為0.1 g/ml的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05 g/ml的硫酸銅溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡藍色的'cu(oh)2沉淀。cu(oh)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的cu2o沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應式如下：
ch2oh—(choh)4—cho+2cu(oh)2→ch2oh—(choh)4—cooh+cu2o↓+2h2o
用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色 棕色 磚紅色(沉淀)。
2.蛋白質的鑒定原理 鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質量濃度為0.1 g/ml的氫氧化鈉溶液(a)和質量濃度為0.01 g/ml(b)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(naoh)中，雙縮脲(h2noc—nh—conh2)能與cu2+作用，形成紫色或紫紅色的絡合物，這個反應叫做雙縮脲反應。由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此，蛋白質可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應。
3.脂肪的鑒定原理 脂肪可以被蘇丹ⅲ染成橘黃色，被蘇丹ⅳ 染成紅色
三、實驗過程(見書p18)
四、實驗用品(見書p18)
五、注意
1.關于鑒定還原糖的實驗，在加熱試管中的溶液時，應該用試管夾夾住試管上部，并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部，同時試管口不要朝向實驗者，以免試管內溶液沸騰時沖出試管，造成燙傷。如果試管內溶液過于沸騰，可以上提試管夾，使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用，切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3.蛋白質的鑒定中先加雙縮脲a，再加雙縮脲b
六、討論
鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的根據是什么？
生物實驗報告格式
第十二篇 生物學實驗報告4450字
關于生物學實驗報告
劉希偉201100140041分子生物學實驗報告
質粒dna的提取、純化及檢測
姓名：___學號：2011001400__年級：20__級生物基地班 實驗日期：2024年9月16日—30日組別：6組 同組者：__
一、實驗目的
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質粒dna的原理和方法。
2、學習并掌握凝膠電泳進行dna的分離純化的實驗原理。
3、學習并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學習并掌握凝膠中dna的分離純化方法。
二、實驗原理
1、質粒dna的制備方法
質粒（plasmid）是獨立存在于染色體外、能自主復制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈dna分子，分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中，但在細菌細胞中含量最多。細菌質粒大小介于1～200kb之間，是應用最多的質粒類群，在細菌細胞內它們利用宿主細胞的復制機構合成質粒自身的dna。
質粒dna的制備包括3個步驟：①培養(yǎng)細菌，使質粒dna大量擴增；②收集和裂解細菌；③分離和純化質粒dna。主要方法包括：堿裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于質粒大量提取。在實際操作中可以根據宿主菌株類型、質粒分子大小、堿基組成和結構等特點以及質粒dna的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質粒dna。
2、質粒dna的提取——堿變性提取法
在細菌細胞中，染色體dna和質粒dna均被釋放出來，但是兩者變性與復性所依賴的溶ph值不同。在ph值高達12。0的堿性溶液中，染色體dna的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性；共價閉合環(huán)狀質粒dna的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。當用ph值4。6的kac（naac）高鹽溶液調節(jié)堿性溶液至中性時，變性的質粒dna可恢復原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結構而溶解于溶液中；但染色體dna不能復性，而是與不穩(wěn)定的大分子rna、蛋白質—sds復合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復性的溶于溶液的質粒dna分離。溶于上清液的質粒dna，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性質類似，乙醇沉淀
dna的同時，也伴隨著rna沉淀，可利用rnasea將rna降解。質粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質粒dna。
3、凝膠電泳進行dna分離純化
電泳（electrophoresis）是帶電物質在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現象。各種生物大分子在一定ph條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質，它具有分子篩效應。含有電解液的凝膠在電場中，其中的電離子會發(fā)生移動，移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化dna的片段，是分子生物學的核心技術之一。
凝膠電泳技術操作簡單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中dna的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈dna在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話，這些分離的dna條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實驗。
分子生物學中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質電泳。它的分辨率非常高，長度上相差1bp或質量上相差0。1%的dna都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行dna序列分析的分子基礎。雖然它能很快地進行電泳，并能容納較大的dna上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物，由β—d—吡喃半乳糖與3，6—脫水—l—吡喃半乳糖組成，相對分子質量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段dna（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測定dna的相對分子質量，分離經限制酶水解的dna的片段，進一步純化dna等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負電荷，在電場中向正極移動。dna在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素：樣品dna分子的大小、dna分子的構象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。
三、實驗材料
1、實驗儀器
培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管（eppendorf管）、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。
2、實驗試劑
lb培養(yǎng)基，抗生素ap（氨芐青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（pci）混合液，預冷無水乙醇，tae電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（eb），dna相對分子質量標準物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸鈉。
四、實驗步驟
1、準備實驗
配制lb液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固體培養(yǎng)基；準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個 ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。
2、菌體培養(yǎng)
在含有ap的lb平板上挑取一環(huán)攜帶有質粒puc19的e。coli dh5單菌落，接種于20mllb液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加ap100ul
（100ug/ml），質粒puc19具有ap抗性基因，使得帶有puc19的質粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉接于50mllb液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數生長期后期，生長速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質少，適合提取質粒。
3、質粒提取
（1）稱量空的50ml離心管的重量為14。331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細胞。
（2）向離心管中懸滴加入5ml冰預冷的溶液ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14。437g，則菌體質量為106mg。
（3）洗滌后每100mg菌體應加入冰預冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細胞提前破裂，防止dna受機械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生長。tris—cl溶液提供適當的ph。
（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（與溶液ⅰ對應），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液ⅱ中的naoh使細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結構向micelle（微囊）結構的相變化導致細胞溶解。同時，強堿性使染色體dna、質粒dna和蛋白質變性；sds為下一步沉淀做鋪墊。
（5）按比例加入冰預冷的溶液ⅲ1。5ml（與溶液ⅰ、ⅱ對應），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質sds復合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因為長時間的堿性條件會打斷基因組dna，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被pds共沉淀。同時變性的質粒dna復性。反應形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。
（6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側，用移液槍將上清液轉移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3mnaac混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對dna很安全，因此是理想的沉淀劑。 dna溶液是dna以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去dna周圍的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph為8左右的溶液中，dna分子是帶負電荷的，加一定濃度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna鈉鹽沉淀。
（7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。
（8）以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質粒呈淺黃色，隨著水分的減少質粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質粒，要在離心管上標記質粒所在位置。
（9）將dna沉淀溶于1mlte緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉移到一個eppendorf管中。te是ph緩沖液，為dna提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護堿基對。同時含有edta是二價陽離子的螯合劑，抑制dna酶作用。
4、質粒純化
（1）eppendorf管中加入rnase a（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0。5—1h
（2）將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中，每管0。5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉移到一潔凈的eppendorf管中。苯酚是經tris飽和后的，顯黃色。苯
酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質。
（3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉移到到另一潔凈的eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑，但是苯酚留在質粒溶液中會影響dna的酶切，它本身易被氧化，會損傷質粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫，有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質的存在。
（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉移到一潔凈的eppendorf管中，得上清液400ul。
（5）向上清液中加入1/10體積的naac混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。
（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到dna沉淀，為白色。
（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應與收集沉淀面一致。
（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulte溶解于1管中。
5、質粒檢測
（1）稱取0。4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標好液面位置，加入40ml的1×tae電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。
（2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內。在槽內加入1×tae 電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。
（3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍色）的移動。
（4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進eb溶液中進行染色，完全浸泡約5min。
（5）凝膠成像儀觀察。
五、注意事項
（1）滴加溶液ii時，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動作要快，因為強堿在溶液中停留時間不能過長，否則會破壞質粒dna。
（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液iii中和強堿使質粒復性，不可劇烈震蕩， 防止染色體dna斷裂，應該上下顛倒離心管，使其混勻。
